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如何保存限制性内切酶？

不太常用的限制性内切酶多保存在-70oC,每周或每天用的酶保存在-20 oC。有一些酶需要不同的保存条件。使用限制性内切酶时，应将酶保存在冰上。

一般的限制性内切酶反应中（也叫消化），应用多少内切酶？

所用的酶量取决于DNA的纯度、量和型态。限制性内切酶的活力单位定义为在适当的温度下，在1小时内，1ugDNA在50ul体积中，被完全消化所 需的限制性内切酶的量。一般说来，线性DNA比超螺旋DNA更易消化。比如，酶切1uglambdaDNA，需要1-2单位的酶，而酶切1ug质粒 DNA，需要3-5单位的酶。

使用限制性内切酶的一般步骤是什么？

一般步骤如下：
A）测试酶切DNA的量
B）计算完全酶切所需的酶量。为使终体积中甘油的浓度低于8%，计算能加的酶量，最多能加终体积的10%（甘油的浓度为5%）。
C）10X反应液的体积应为终体积的1/10；10X反应液的体积不应小于酶的体积。
D）加入计算好的DNA，10X反应液，酶。
加入水到终体积（20-50 ul），轻轻混匀，在适当的温度下保温。一般酶的最适温度为37 oC，但有例外。应查讯分析说明。

比如：
质粒DNA （2ug/ ul） 5 ul
10X反应液 5 ul
酶（5ug/ ul） 5 ul
dH₂O 35 ul
50 ul
37 ℃保温2-3小时。

应最后加酶。

能否在一次反应中用很多的限制性内切酶？

可以，一般而言，甘油浓度超过8%对酶切有抑制。有些酶在高的甘油浓度中会产生星活力。限制性内切酶提供在50%的甘油中，故10 ul反应体积中不应加入超过1.6 ul的酶。

消化反应中是否需要加牛血清白蛋白（BSA）？

不需要。酶切不需要加BSA。但Promega公司的限制性内切酶活力测定时，均加入乙酰化的BSA达0.1mg/ml。BSA可以提高许多限制性 内切酶活力。Promega公司的限制性内切酶均提供一管乙酰化的BSA（R396D，E，F），并建议酶切时加入BSA达0.1mg/ml。

星活力是什么？

星活力是指在保温条件改变，如NaCl过多存在于反应液中，使酶切的核酸序列不同于它特定的识别序列。

什么是同切酶？

同切酶指两个酶的识别位点和酶切位点相同，如SphI(CGTAC'G)和BbuI(CGTAC'G)互为同切酶。

什么是neoschizomer？

Neoschizomer指两个酶的识别序列相同，但酶切位点不同，如SmaI(GGG'CCC)和XmaI(G'GGCCC)互为neoschizomer。

什么是蓝/白克隆测试？

蓝/白克隆测试是一种确定酶切样品中，存在的少量外切核酸酶活力的质量检查过程。通过测定一个功能基因（Beta-半乳糖苷酶）酶切和重新连接后， 蓝/白斑的比例，来确定外切核酸酶活力。如果存在少量外切核酸酶活力，或不存在外切核酸酶活力，得到的是蓝色菌落。产生粘性末端的酶实验产生的白色菌落应 小于2%，而产生平头末端的酶实验产生的白色菌落应小于5%。这个方法的灵敏度很高，可以检测出缺失一个碱基的酶切末端。

限制性内切酶是如何命名的？

限制性内切酶命名的次序如下：
A） 用3个字母代表来源的生物（如Bam代表 Bacillus amyloliquefaciens）
B） 1个字母或阿拉伯数字代表菌株（BamH）
C） 1个罗马字母代表发现或鉴定的次序（BamHI）

如何稀释限制性内切酶？

如果1小时内会使用限制性内切酶，可用补充有0.5mg/ml BSA的1X反应液稀释，如果在更长的时间内才会使用限制性内切酶，用酶贮存液稀释。

以上资料摘自Promega网站。

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