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如何保存限制性内切酶？

不太常用的限制性内切酶多保存在-70oC,每周或每天用的酶保存在-20 oC。有一些酶需要不同的保存条件。使用限制性内切酶时，应将酶保存在冰上。

一般的限制性内切酶反应中（也叫消化），应用多少内切酶？

所用的酶量取决于DNA的纯度、量和型态。限制性内切酶的活力单位定义为在适当的温度下，在1小时内，1ugDNA在50ul体积中，被完全消化所 需的限制性内切酶的量。一般说来，线性DNA比超螺旋DNA更易消化。比如，酶切1uglambdaDNA，需要1-2单位的酶，而酶切1ug质粒 DNA，需要3-5单位的酶。

使用限制性内切酶的一般步骤是什么？

一般步骤如下：
A）测试酶切DNA的量
B）计算完全酶切所需的酶量。为使终体积中甘油的浓度低于8%，计算能加的酶量，最多能加终体积的10%（甘油的浓度为5%）。
C）10X反应液的体积应为终体积的1/10；10X反应液的体积不应小于酶的体积。
D）加入计算好的DNA，10X反应液，酶。
加入水到终体积（20-50 ul），轻轻混匀，在适当的温度下保温。一般酶的最适温度为37 oC，但有例外。应查讯分析说明。