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1. dNTP终浓度200μM足矣，过高（>4mM）会对扩增反应产生抑制。一般，dNTP产品包装的浓度是10mM（dATP、dCTP、dTTP、dGTP各2.5mM），因此，50μL的反应体系中加入1ul dNTP即可。

2. 扩增体系中模板的量不宜过多，否则可能会出现目的条带弥散模糊。

3. Mg离子浓度过高会导致非特异性扩增，过低又会使聚合酶无法与模板结合。最优的Mg离子浓度需要摸索，不过，按照你自己的习惯和经验来就可以了。

Mg离子的作用：

Mg与dNTP以及DNA模板结合形成复合体，只有这种复合体才能被DNA聚合酶识别

注意事项：
镁离子的浓度取决于dNTP、PPi、EDTA等这些带负电荷的可以与Mg结合的物质的浓 度。所以镁离子的浓度一定要比这些物质的浓度高才可以。最适合的浓度应该是通过试验摸索获得的，基本上它应该介于1 mM到5 mM之间。最常用的比例是MgCl2浓度1.5 mM，每种dNTP浓度0.2 mM。过量的镁离子可能会引发非特异的复制起始，而量不足则容易会造成产率过低。

下面的内容摘自《分子克隆》第三版 附录2

①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22 μm滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。

注意：镁离子是四环素的拮抗剂。对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。

下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度

甲型H1N1流感3D结构模型

（生物谷注：红点代表药物及其他原子，蓝色点代表甲型H1N1病毒相比1918年流感病毒新变异点，黄点代表甲型H1N1流感出现在不同病例中的变异点，橙色点代表只在一个甲型H1N1流感病例中出现的变异）

新加坡科研人员在新一期《生物学指南》杂志上发表论文说，他们在获得首例人感染甲型H1N1流感病毒样本后，用两周时间研制出了与该病毒有关的一种关键蛋白质的三维结构模型。这一研究成果将有助于科研人员开发防治甲型H1N1流感的药物和疫苗。

1. http://www.fruitfly.org/seq_tools/promoter.html

2. http://www.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html

    原核生物基因表达的调控可以在DNA复制、转录和翻译三个不同层次进行表达调控。其中，转录水平的调控是最主要的，也是最经济，最有效的方式。但转 录生成mRNA以后，再在翻译或翻译后水平进行微调，是对转录调控的有效补充，例如:λ噬菌体的后期基因是长达26kb的一个片段，作为一个单位转录成多 顺反子mRNA。然而不同基因编码的蛋白质用量不同，相差可达千倍，这就需要通过翻译再进行调节。在翻译调控方面，mRNA的寿命、mRNA本身所形成二 级结构都可影响到翻译的进行。除此之外，有些基因的产物也可通过与其mRNA的结合，控制这种蛋白质的继续合成，如释放因子RF2和核糖体蛋白质的自体调 控。另外，在不良营养条件下，由于氨基酸的缺乏，也可使细胞内蛋白质的合成受到抑制，出现严谨反应。总之，由于存在翻译水平的调控，使得原核生物基因表达 调控更加适应生物本身的需求和外界条件的变化。
翻译的过程可分为三种不同的阶段―起始，延伸和终止。现在了解相对较多的翻译水平的调控包括：mRNA翻译水平差异的调控，翻译起始的调控，翻译阻遏作用，蛋白质合成的自体调控，反义RNA的作用等几个方面。

关于蛋白质的亚细胞定位的预测，In general，预测方法分为3个步骤。首先，为每一类亚细胞locations构建客观而具有代表性的数据集。其次，从数据集中提取特征参数或 descriptor。最后也是最关键的一步，通过算法比较查询序列中所包含的特征参数与各类相应的location的相似度，作出判断，一般会用一组概 率的形式来表述。很明显，其中大量运用的是机器学习理论和统计学的方法。对算法有兴趣的朋友可以参考下面这一篇综述，“An overview on predicting the subcellular location of a protein” In Silico Biology 2002 http://www.bioinfo.de/isb/2002/02/0027/main.html

以下是该综述中涉及的部分server，都是比较经典的。

PSORT：http://psort.nibb.ac.jp

Introduction to Western Blot Activity

Introduction

描述：通用亚克隆载体
使用方法：质粒用EcoRV酶切并胶回收，与平端PCR产物连接，在IPTG+X-gal平板上挑选白色转化子检验。 

序列：

无细胞体系中的蛋白质合成

摘要：
    最近几年无细胞的蛋白质表达系统再次受到关注，因为无细胞系统有其优点。例如，可改变反应条件以利于蛋白质折叠；对有毒表达产物的灵敏性降低；可减小反应体积，缩短反应时间，适合于高通量表达。而且通过改善翻译效率可使每毫升反应混合物中目标蛋白质的产率可达到毫克水平。总之，在无细胞系统合成蛋白质可促进蛋白质组学的研究。