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蛋白质表达与纯化总结PPT

    原核生物基因表达的调控可以在DNA复制、转录和翻译三个不同层次进行表达调控。其中，转录水平的调控是最主要的，也是最经济，最有效的方式。但转 录生成mRNA以后，再在翻译或翻译后水平进行微调，是对转录调控的有效补充，例如:λ噬菌体的后期基因是长达26kb的一个片段，作为一个单位转录成多 顺反子mRNA。然而不同基因编码的蛋白质用量不同，相差可达千倍，这就需要通过翻译再进行调节。在翻译调控方面，mRNA的寿命、mRNA本身所形成二 级结构都可影响到翻译的进行。除此之外，有些基因的产物也可通过与其mRNA的结合，控制这种蛋白质的继续合成，如释放因子RF2和核糖体蛋白质的自体调 控。另外，在不良营养条件下，由于氨基酸的缺乏，也可使细胞内蛋白质的合成受到抑制，出现严谨反应。总之，由于存在翻译水平的调控，使得原核生物基因表达 调控更加适应生物本身的需求和外界条件的变化。
翻译的过程可分为三种不同的阶段―起始，延伸和终止。现在了解相对较多的翻译水平的调控包括：mRNA翻译水平差异的调控，翻译起始的调控，翻译阻遏作用，蛋白质合成的自体调控，反义RNA的作用等几个方面。

pET 载体中，目标基因克隆到 T7 噬菌体强转录和翻译信号控制之下，并通过在宿主细胞提供 T7 RNA 聚合酶来诱导表达。 Novagen 的 pET 系统不断扩大，提供了用于表达的新技术和选择，目前共包括 36 种载体类型、 15 种不同宿主菌和设计用于有效检测和纯化目标蛋白的许多其它相关产品。

优点
· 是原核蛋白表达引用最多的系统
· 在任何大肠杆菌表达系统中，基础表达水平最低
· 真正的调节表达水平的“变阻器”控制
· 提供各种不同融合标签和表达系统配置
· 可溶性蛋白生产、二硫键形成、蛋白外运和多肽生产等专用载体和宿主菌
· 许多载体以 LIC 载体试剂盒提供，用于迅速定向克隆 PCR 产物
· 许多宿主菌株以感受态细胞形式提供，可立即用于转化
阳性 pFORCE TM 克隆系统具有高效克隆 PCR 产物、阳性选择重组体和高水平表达目标蛋白等特点。

pET 系统概述