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蛋白质表达与纯化总结PPT

建议用下列方法恢复培养冷冻干燥的菌种。

一、安瓶管开封

　　1．用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管。

　　2．用火焰将安瓿管顶端加热。

　　3．滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。

　　4．用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。

二、菌株恢复培养

　　1．用无菌吸管，吸取0.3～0.5ml适宜的液体培养基，滴人安瓿管内，轻轻振荡，使冻于菌体溶解呈悬浮状。

　　2．取0.1～0.2ml菌体悬浮液，移植于适宜的琼脂斜面／平板培养基上，剩余的菌液，注入适宜的液体培养基内，然后在建议的温度下培养。

　　3．若未能活化，或活化后有疑问时，请于收到菌种1个月内，通知保藏中心，经查证无误后，即免费补寄。

三、注意事项

　　1．菌种活化前，请将安瓿管保存在6一10℃的环境下。

　　2．厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。

　　3．某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长，此时请将步骤二(2）重复一次。

转自：http://www.ctcccas.ac.cn/junzhong/huifupeiyang.htm

Introduction to Western Blot Activity

Introduction

 cystal of ice will form that can mechanically shear the protein.the same as DNA.
for storage of DNA, it is better to be stored in buffer to avoid such mechanical shearing and hydrolysis, if you concern about EDTA, you can use Tris-HCl (pH 8.0).
    Here is some general guide for storage of purified proteins:
    For short term storage (up to 24 h), most proteins can be kept at 4C.

pET 载体中，目标基因克隆到 T7 噬菌体强转录和翻译信号控制之下，并通过在宿主细胞提供 T7 RNA 聚合酶来诱导表达。 Novagen 的 pET 系统不断扩大，提供了用于表达的新技术和选择，目前共包括 36 种载体类型、 15 种不同宿主菌和设计用于有效检测和纯化目标蛋白的许多其它相关产品。

优点
· 是原核蛋白表达引用最多的系统
· 在任何大肠杆菌表达系统中，基础表达水平最低
· 真正的调节表达水平的“变阻器”控制
· 提供各种不同融合标签和表达系统配置
· 可溶性蛋白生产、二硫键形成、蛋白外运和多肽生产等专用载体和宿主菌
· 许多载体以 LIC 载体试剂盒提供，用于迅速定向克隆 PCR 产物
· 许多宿主菌株以感受态细胞形式提供，可立即用于转化
阳性 pFORCE TM 克隆系统具有高效克隆 PCR 产物、阳性选择重组体和高水平表达目标蛋白等特点。

pET 系统概述

描述：通用亚克隆载体
使用方法：质粒用EcoRV酶切并胶回收，与平端PCR产物连接，在IPTG+X-gal平板上挑选白色转化子检验。 

序列：

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